Оспа птиц лабораторное исследование

Оспа птиц — контагиозная болезнь птиц разных видов (кур, голубей, канареек, скворцов, перепелов, индюков, фазанов, попугали), протекающая с поражением слизистых оболочек ротовой, носовой полостей и кожных покровов преимущественно неоперенных участков тела.

болезнь распространена повсеместно. Отмечается ее сезонное осенне-весеннее усиление. Экономический ущерб заключается в снижении яйценоскости и вынужденном убое больных и переболевших птиц.

Характеристика возбудителя. Вирус относится к семейству Poxviridae, подсемейству Chordopoxvirinae и роду Avipoxvirus. Вирионы овальной или прямоугольной формы, размером в среднем 140—450 нм и со сложным типом симметрии. Состоят из нуклеоида, содержащего геном, боковых тел и наружной липопротеидной оболочки, образующей выступы. Геном представлен двуспиральном линейной ДНК.

Устойчивость к физико-химическим воздействиям. Вирус разрушается при высоких температурах. Высушивание и холод консервируют его. В лиофилизированном виде сохраняется до 8 лет, в патологическом материале (оспенные корочки) при температуре минус 15 °С сохраняет инфекционность более 2 лет. Чувствителен к жирорастворителям и быстро инактивируется в гниющем материале.

Антигенная структура. Вирионы вируса оспы содержат наружным протеидный антиген в составе поверхностных ворсинок (филаментов). Наружный антиген индуцирует образование антигемагглютинирующих вируснейтрализующих антител, которые обеспечивают развитие иммунитета. Внутренние полипептиды индуцируют комплементсвязывающие и преципитирующие антитела.

Антигенная вариабельность и родство. Штаммы вируса оспы кур идентичны в антигенном отношении, но различаются по спектру патогенности, вирулентности и гемагглютинирующей активности.

Между вирусами оспы кур, голубей и индеек существует антигенное родство. Вирусы оспы канареек, перепелов и попугаев в иммунобиологическом отношении отличаются от вирусов оспы кур и голубей.

Антигенная вариабельность у вида вируса оспы кур не установлена. Однако штаммы вируса оспы различаются по спектру патогенности и по вирулентности.

Межродовое антигенное родство установлено между вирусами оспы кур и оспы овец и коз, а также между вирусами оспы птиц и миксоматоза кроликов, оспы коров и эктромегалии мышей (в РСК, РДП)

В иммунобиологическом отношении вирус оспы кур родственен вирусу оспы голубей и индеек, а также овец и коз, однако не родственен вирусам оспы канареек, перепелов и попугаев.

Культивирование вируса. Вирусы оспы кур и голубей хорошо размножаются на ХАО куриных эмбрионов, в первичной культуре клеток куриных фибробластов, вызывая ЦПД и образование симпластов, и в перевиваемой культуре клеток QT-35.

Гемагглютинирующие свойства. Вирус оспы птиц способен агглютинировать эритроциты кур некоторых пород (0,5%-ная взвесь эритроцитов на физиологическом растворе, pH 7,2—7,4; 37 °С). Суспензия вируса при консервировании 0,5%-ным формалином и хранении при 4 °С сохраняет гемагглютинирующую активность более 8 мес и может быть использована в РГА и РТГА.

Экспериментальная инфекция. Воспроизводится на неиммунных цыплятах и курах при заражении в скарифицированный гребень, бородки и перьевые фолликулы. Оспенный фолликулит удается получить и при заражении голубей разного возраста.

Клинические признаки. Инкубационный период болезни длится в среднем 15—20 дней. В дальнейшем у больной птицы ухудшается аппетит, появляется вялость, снижается яйценоскость. Болезнь может приобретать кожную, дифтеритическую или смешанную формы течения.

При кожной форме чаще на гребне, бородках, сережках, основании клюва, щеках, клоаке, иногда по всему туловищу развиваются бородавчатые образования (оспины). Течение чаще доброкачественное, летальность низкая.

При дифтеритической форме развивается дифтеритическое воспаление слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, а также гортани, трахеи, бронхов и глаз. Прогноз неблагоприятный, летальность в холодное время года может достигать 70 %.

Патологоанатомические изменения. Они достаточно специфические и зависят преимущественно от формы течения болезни. Чаще всего у павшей птицы на характерных участках можно обнаружить одновременно и желтовато-белые возвышающиеся пятна разного размера, иногда покрытые красно-кровянистым струпом, творожистые массы или дифтеритические пленки в дыхательных путях и кишечнике.

Локализация вируса. В организме больной птицы вирус локализуется в оспинах бесперьевых участков головы, на слизистой глотки, гортани, трахеи. На 17—20-й день после инфицирования вирус можно обнаружить в крови, почках, яичниках, селезенке, головном мозге.

У переболевшей птицы остается длительное вирусоносительство (более 10 мес).

В окружающую среду вирус выделяется с содержимым оспин и корочками от больных птиц.

Источник инфекции — больная птица. Переносчиками возбудителя служат клещи и клопы. Вирус передается контактным путем через загрязненные инвентарь, одежду персонала, непосредственно через поврежденную кожу, а также воздушно-капельным и алиментарным путями через загрязненные корм и воду.

В естественных условиях некоторые штаммы вируса оспы кур патогенны только для кур, другие — для кур, голубей и индеек. Есть штаммы, патогенные не только для птиц, но и для других видов животных, например кроликов. По спектру патогенности вирусы оспы птиц можно расположить в следующем порядке: голуби, индейки, куры, канарейки.

Диагностика. Диагноз на оспу птиц ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических и лабораторных данных. Результаты лабораторных исследований являются решающими и диагностике.

Взятие и подготовка материала. От больной птицы срезают оспины (корочки) которые помещают в 50%-ный раствор глицерина и в термосе с охлаждающей смесью транспортируют в лабораторию. Или непосредственно из оспин делают маски-отпечатки, высушивают, фиксируют в спиртоэфирной смеси и отправляют на исследование. От трупов берут дифтеритически пораженные гортань и трахею.

В лаборатории готовые мазки-отпечатки окрашивают и исследуют в световом микроскопе. Из консервированных оспин (корочек) готовят 10%-ную суспензию, которую используют для выделения вируса.

Лабораторная диагностика. Включает индикацию вирионов оспы (элементарных телец) методом световой микроскопии, выделение вируса на куриных эмбрионах или на цыплятах и идентификацию выделенного вируса методом световой микроскопии, вирусоскопии, РИФ и РДП (дополнительно).

Индикацию вируса проводят методом световой микроскопии (вирусоскопия). Для этого готовят мазки-отпечатки из патологического материала или используют уже готовые, привезенные из очага инфекции.

Окрашивают их методом серебрения по Морозову. Мазок покрывают жидкостью Руге (реактив № 1: 1,0 мл ледяной уксусной кислоты, 2,0 мл 40%-ного формальдегида и 100 мл дистиллированной воды) на I мин; промывают дистиллированной водой; протравливают раствором танина (реактив N9 2: 1 г танина и 5 мл дистиллированной воды) в течение 1—2 мин, подогревая до появления паров; промывают и наносят раствор аммиачного серебра (реактив № 3: 5 г кристаллов аммиачного серебра растворяют в 100 мл дистиллированной воды, и к 80 мл полученного раствора добавляют по каплям 25%-ный раствор аммиака до растворения осадка; для окрашивания полученный реактив разводят дистиллированной водой 1 : 10); слегка прогревают до темно-коричневой окраски мазка; промывают дистиллированной водой и просматривают под иммерсионным маслом в световом микроскопе.

Вирусоскопия считается положительной только при наличии характерных образований (элементарных телец Борреля — вирионов оспы) темно-коричневого цвета, в массовом количестве расположенных по всему мазку. При отрицательной вирусоскопии проводят биопробу на куриных эмбрионах или цыплятах. Обнаружение специфических телец-включений (телец Боллингера) в цитоплазме инфицированных клеток является ориентировочным методом индикации вируса оспы.

РИФ является дополнительным экспресс-методом диагностики оспенных антигенов в патологическом материале и позволяет получить результат через 5—7 ч после поступления материала на исследования.

Выделение вируса оспы из патологического материала проводят на 10—12-дневных куриных эмбрионах, которые заражают на ХАО и инкубируют 5—6 дней. Признаком размножения вируса следует считать отдельные или сливные оспины на ХАО, а также значительное утолщение или желеобразный отек всей ХАО (при высокой заражающей дозе). При отсутствии оспин делают три слепых пассажа.

Из оспин на ХАО делают мазки-отпечатки и проводят вирусоскопию (как указано выше).

Биопробу на цыплятах проводят на неиммунных к вирусу оспы 3—4-месячных цыплятах, которым инокулируют 10%-ную суспензию из патологического материала методом втирания (накожно) в скарифицированную поверхность гребня, бородок или в перьевые фолликулы голени. При наличии в материале вируса на месте втирания на 5—6-й день развиваются оспенные поражения. Специфичность этих поражений идентифицируют методом вирусоскопии мазков.

Идентификация выделенного вируса обычно ограничивается вирусоскопией, однако в дополнение к ней можно использовать, и серологические реакции (РДП и РИФ), которые проводят по общепринятым методикам.

Ретроспективная диагностика. Проводится редко. В случае стертого течения болезни у кур, не имеющих видимых клинических признаков, исследуют парные сыворотки в РДП. Однако Преципитирующая сыворотка реконвалесцентов часто оказывается слабоактивной, и у 15 % больных оспой кур антитела не выявляются.

Разрабатываются диагностические наборы на обнаружение специфических антител против вируса оспы птиц методами РИГА и ИФА, которые должны позволить проводить широкомасштабные эпизоотологические мониторинги.

Иммунитет и специфическая профилактика. В нашей стране разработаны и применяются живые аэрозольные вакцины двух типов: из нереактогенного гетерологичного штамма вируса оспы голубей Нью-Джерси и из природно-ослабленного штамма оспы кур АШ-27. А также разработана вакцина из аттенуированного культурального штамма К вируса оспы кур, которую вводят парентерально в перепонку крыла. Иммунитет у привитых цыплят в среднем сохраняется в течение 3—6 мес, у кур — до 10 мес.

Оспа птиц (Variolaavium, оспа-дифтерит птицы) — контагиозная болезнь, характеризующаяся образованием на коже специфических оспин, а на слизистых оболочках полости рта, верхних дыхательных путей и конъюнктиве глаз — дифтеритический пленок и наслоений.

Историческая справка. Оспа известна еще с XVIII в., Когда Гузард подробно описал это заболевание в 1775 г. под названием «конъюнктивит кур». Возбудитель болезни впервые установили в 1902 г. Е. Маркс и И. Штиккер. После этого на протяжении двух десятилетий господствовало мнение, что оспа и дифтерит, означающие две формы клинического проявления одной болезни, являются двумя различными болезнями (Борде, фале, 1910). И только в 1935 г. было доказано единую природу их возбудителей и заменено название болезни «оспа-дифтерит» на «оспу». В 1904 г. А. Бо-ррель обнаружил в коже больного оспой птицы элементарные тельца (ви-Риони) вируса, которые стали называть «тельцами Борреля». Другие внутриклеточные включения, которые были открыты Боллингером, впоследствии приобрели диагностического значения и были названы его именем, представляют собой накопление десятков тысяч вирионов.

Заболевания птицы оспой регистрируется во многих странах мира. Экономический ущерб, который наносит оспа птицы, связанные с высокой летальностью (15 — 60%), длительным снижением несущей, низким выходом птенцов при инкубации, значительными затратами на проведение карантинно-ограничительных и ветеринарных мероприятий по ликвидации заболевания. Над разработкой мер профилактики и борьбы с оспой птицы плодотворно работали И. Н. Дорошко, Н. В. Ли-хачов, А. Б. Байдевлятов, В. Ф. Зборщенко.

Возбудитель болезни — ДНК-геномный вирус из семейства Poxviridae, рода Avipoxvirus. Имеет цеглиноподибну форму с округлыми краями, размеры 170 х 350 нм, сложный тип симметрии. В пораженных тканях вирус проявляется в виде телец Борреля или телец Боллингера. Окрашенные по Пашена вирионы оспы проявляются при среднем увеличении под световым микроскопом. Различают следующие антигенные виды вируса, как вирус оспы кур, вирус оспы голубей, вирус оспы канареек, вирус оспы индюков, вирус оспы скворцов. Возбудитель оспы хорошо культивируется на хорион-алантоисний оболочке в 10 — 12-дневных куриных эмбрионах и в культуре клеток фибробластов куриного эмбриона.

Вирус оспы очень устойчив во внешней среде. Оспинки, отступивших из кожи, сохраняют свою заразительность при рассеянном свете до 2 мес, на зерне — до 180 суток, в птичнике — до 158 суток, на земляном полу — до 120 суток, на поверхности перьев и пуха — 182 суток, в водопроводной воде — до 90 суток. При температуре — 15 ° С вирус остается жизнеспособным до 2 лет, в лиофилизированном состоянии под вакуумом — до 8 лет. Солнечный свет разрушает вирус через 1 — 7 суток, нагревание до 56 ° С — через ЗО мин, кипячение — через 55 мин. Чувствителен к этилового спирта, быстро погибает при гниении.

Эпизоотология болезни. Оспой болеют куры, индюки, голуби, цесарки, куропатки, павлины, фазаны и мелкие певчие птицы. Более чувствительны молодые птицы, особенно в период полового созревания. Заболевания цыплят в возрасте до 30 дней наблюдается очень редко. Утки и гуси мало-восприимчивы к вирусу оспы. Источником возбудителя инфекции является больной и переболевшая птица, которая в течение 2 мес после выздоровления выделяет вирус с оспенных корочками, фекалиями, слизью из ротовой и носовой полостей, истечениями из глаз. Факторами передачи возбудителя могут быть контаминированы возбудителем корма, вода, яйца, подстилка, инвентарь, предметы ухода за птицей, одежду и обувь обслуживающего персонала. Вирус может распространяться через жалящих и кровососущих насекомых и клещей. Заражение происходит контактно при совместном содержании больной и здоровой птицы, перорально и респираторным путем.

В организм вирус попадает через поврежденную кожу и слизистые оболочки ротовой полости и пищевода. Первичное возникновение в хозяйстве оспы птицы чаще обусловливается занесением возбудителя болезни извне. В таком случае энзоотии оспы проявляется быстрым распространением болезни, которая на протяжении 2 — 3 недель охватывает большую часть поголовья. Большая скученность птицы, недостаточная вентиляция, гиповитаминоз А способствуют осложнению болезни секундарной микрофлорой, обусловливают высокую летальность — до 70% и более. Заболевания в стадии длится 3 — 4 недели. Переболевшая птица становится устойчивой против последующей инфекции в течение 1 — 2 лет. Поэтому инфекция угасает, однако, постоянно поддерживаясь вирусоносителями и возбудителем по окружающей среде, приобретает стационарного характера. В стационарных ячейках оспа проявляется только среди нового неиммунного молодняка птицы, чаще осенью, зимой и весенней поры на фоне неблагоприятных условий содержания и неполноценного кормления. Такая эпизоотическая особенность оспы значительно затрудняет борьбу с инфекцией и требует решительных действий для окончательной ее ликвидации.

Патогенез. После проникновения в эпителиальные клетки поврежденной кожи или слизистых оболочек вирус быстро размножается, попадает в кровь, вызывая виремии и генерализацию процесса. С током крови возбудитель болезни разносится по всему организму и на 7 — 15-е сутки оказывается в почках, селезенке, головном мозге, а также в оспины. Характерной особенностью патогенетического действия вируса оспы является образование специфических эпителия на гребне и бородке и дифтеритический пленок на слизистых оболочках ротовой полости, гортани, трахеи. Дифтеритическое наслоения нередко становятся причиной затруднения дыхания, удушья и даже гибели больной птицы. В органах и тканях переболевших кур вирус персистирует до 487 суток.

Клинические признаки и течение болезни. Дифтеритическое форма имеет более медленный ход, сопровождающийся образованием на слизистой оболочке ротовой полости, глотки, языка, а иногда гортани и пищевода, дифтеритический пленок, имеющих вид серовато-желтых налетов и плотно прилегают к слизистой. После удаления пленок обнажаются кровоточащие эрозии и язвы, которые вскоре снова покрываются пленками. В заболевшего птицы наблюдают затруднено, с сопением, дыхания, истощение, малоподвижность, трудности в приеме кормов и воды, резкое снижение яйценоскости. Нередко заболевание осложняется секундарной микрофлорой, что значительно ухудшает общее состояние птицы. Выздоровление наступает в конце 5 — 6-й недели. В переболевшей птицы очень медленно восстанавливается яйценоскость.

При смешанной форме болезни оказывается одновременное поражение кожи и слизистых оболочек. Течение заболевания тяжелое, часто заканчивается гибелью. В части птицы оспа приобретает хроническое течение, сопровождается резким похуданием, удушьем, часто осложняется энтеритом, что приводит к полному истощению и гибели.

Патологоанатомические изменения. Наиболее характерные на коже и слизистых оболочках и отображают клиническую форму перенесенной болезни. У птицы, в отличие от оспенных поражений млекопитающих, отсутствуют типичные пустулы с углублением в центре. Дифтеритическое поражение слизистых оболочек ротовой и носовой полостей, гортани, трахеи, бронхов, воздухоносных мешков имеют вид сырообразных налетов желто-серого или бурого цвета. Воздухоносные мешки и трахея иногда заполнены фибринозной массой. При гистологическом исследовании обнаруживают набухание и увеличение в объеме эпителиальных клеток, в которых у ядра определяются тельца-включения Боллингера, представляющие покрытые липопротеидной оболочкой колонии вируса оспы.

Диагноз основывается на анализе эпизоотологических, клинических данных, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований.

Лабораторная диагностика. Включает световую и электронную вирусоскопию мазков из патологического материала для обнаружения элементарных телец Борреля и телец-включений Боллингера; выделение вируса из патологического материала в куриных эмбрионах или в культурах клеток фибробластов куриных эмбрионов; индикацию и идентификацию вируса оспы в патологическом материале, взятом от больной птицы, а также в околоплодной жидкости инфицированных куриных эмбрионов и первичной культуре клеток фибробластов с помощью серологических реакций — реакции иммунофлюоресценции (РИФ) и реакции диффузной преципитации (РДП) в агаровом гели, проведение биологической пробы на 3 — 4-месячных цыплятах.

В лабораторию для исследования направляют 5 — 6 клинически больных птиц (кур, индеек, голубей, цесарок). Из свежих оспин или дифтеритический поражений слизистой оболочки гортани и трахеи готовят мазки-отпечатки и окрашивают их серебрением по Морозову или по Пашена. Во время микроскопического исследования оспенные вирионы выявляются в виде круглых или цеглиноподибних образований черного или темно-коричневого цвета, размещенных поодиночке, попарно, короткими цепочками или скоплениями. В окрашенных по Пашена препаратах определяются мелкие круглые оспенные вирионы темно-красного цвета.

Для выделения вируса оспы проводят заражения ХАО 10 — 12-дневных куриных эмбрионов 10%-ю суспензией патологического материала, взятого от больных птиц. Через 3 — 6 суток инкубации все погибшие куриные эмбрионы или охлажденные при 4 ° С вскрывают и исследуют на наличие оспенных поражений на ХАО. Вирус оспы кур вызывает образование на ХАО мелких плоских поражений, иногда с неровными краями, серовато-белого цвета; вирус оспы голубей — толстых, крупных, припиднятих посередине оспенных поражений и желеобразного отек всей оболочки (вид медузы); вирус оспы индюков — слабо определенных очаговых оспин, часто окруженных кольцеобразной зоны поражения. Мазки-отпечатки с оспенных поражений ХАО окрашивают и исследуют под микроскопом для выявления вирусных элементарных телец и телец-включений. Изготовленную из оспенных поражений хорион-алантоиснои оболочки суспензию исследуют с помощью РДП со специфическими преципитувальнимы сыворотками для идентификации вирусного антигена. В сомнительных случаях прибегают к биопробы на неиммунных к вирусу оспы молодых курах 3 — 4-месячного возраста, которым патологический материал втирают в скарификовану поверхность кожи гребня и бородок или в перьевые фолликулы голени сразу после выщипывания перьев. В случае наличия в исследуемом патологическом материале вируса оспы через 5 — 7 суток после заражения на коже гребня и бородок появляются характерные оспины, а на голени развивается типичный для оспы фолликулит. Во время микроскопического исследования окрашенных мазков-отпечатков с оспин и пораженных перьевых фолликулов голени проявляют оспенные вирионы. Патологический материал из соскобов гребня и перьевых фолликулов исследуют с РДП на специфичность.

Для установления диагноза большое значение имеет выявление пато-гномоничних телец-включений Боллингера. Для этого из пораженных очагов кожи и слизистой оболочки делают очень тонкие срезы, раздавливают их между двумя предметными стеклами и окрашивают Суданом-3. Во время микроскопического исследования тельца-включения Боллингера определяются в протоплазме клеток в виде окрашенных в желтый цвет круглых накоплений вирионов с равномерной зернистостью.

Дифференциальная диагностика. Предусматривает исключение инфекционного ларинготрахеита, пастереллеза, гиповитаминоза А, аспергиллеза, кандидомикоза. При инфекционном ларинготрахеите кур наблюдается быстрое распространение болезни, острый ее течение, никогда не бывает поражений кожи. Пленки на слизистой оболочке легко снимаются, не кровоточат. Нахождение под микроскопом цитоплазматических телец-включений Боллингера в раздавленных срезах с пораженной кожи или слизистой оболочки позволяют быстро и надежно дифференцировать оспой от инфекционного ларинготрахеита кур. За острого течения пастереллеза характерные явления геморрагического диатеза; посевы из крови и органов трупов птицы дают возможность уже через сутки выявить биполярные бактерии и выделить возбудителя болезни. Хроническое течение пастереллеза сопровождается поражением суставов и сережек, на вскрытии устанавливают бронхопневмонию. Во время бактериологического исследования выделяется культура пастерел. Дифтеритическое форму оспы нужно отличать от авитаминоза А, при котором пленки снимаются очень легко, не оставляя кровоточащих язв. Кроме того, при авитаминозе на слизистой оболочке пищевода образуются многочисленные узелки величиной с просяное зерно, а при оспе — большие дифтеритическое наслоения. При гипоавитаминози А не бывает кожных поражений, в эпителиальных клетках не выявляются тельца-включения Боллингера. А с-пергильоз и кандидамикоз устанавливают на основании результатов микологических исследований — микроскопического выявления мицелия грибов и выделение чистой культуры соответствующего возбудителя на среде Чапека, агаре Сабуро или сусло-агаре.

Лечение. Специфических методов лечения оспы не разработано. Больному птицы добавляют в корма зелень, морковь, сенная мука. При дифтеритический форме пленки со слизистых оболочек ротовой полости удаляют, эрозионные поверхности смазывают эмульсией пенициллина на рыбьем жире, йод-глицерином или пиоктанином. Рекомендуются внутримышечные инъекции 40%-го раствора уротропина из расчета 0,6 — 1,0 г / кг массы или террамицин в дозе 1 мг / кг.

Иммунитет. В переболевшей оспой птицы длится 2 — 3 года. Для проведения предохранительных прививок против оспы предложено сухую вирусвакцину из вируса оспы голубей из штамма НД. Вакцину применяют для прививок цыплят с 1 — 1,5-месячного возраста путем втирания в перьевые фолликулы голени. Иммунитет наступает через 3 недели и продолжается у цыплят до 3 мес, у взрослых кур — до 10 мес.

Профилактика и меры борьбы. Основываются на организации защиты птицеферм от заноса возбудителя оспы, своевременной диагностике заболевания, выявлении и ликвидации источника возбудителя болезни и факторов его распространения. Особое внимание следует уделять выполнению зоогигиенических и ветеринарно-санитарных мероприятий при удержании молодых цыплят, обеспечению птицы полноценными рационами, своевременному проведению предупредительных прививок против оспы в неблагополучных хозяйствах.

В случае появления заболевания птицеферму объявляют неблагоп-лучной и вводят карантин с запретом вывоза птицы и яиц для инкубации. Всю больную и подозреваемую по заболеваемости оспой птицу, а также слабую молодежь птицы забивают на санитарной бойне. Условно здоровую птицу, которая не имеет клинических признаков болезни, используют на мясо. Клинически здоровых кур прививают вирусвакциною оспы голубей из штамма НД. После удаления птицы проводят тщательную очистку и дезинфекцию птичника и оборудование 2%-м раствором гидроксида натрия, 20%-ю суспензию свежегашеной извести, просветленным раствором хлорной извести, содержащей 2% активного хлора, 2% раствором формальдегида. Ограни-из неблагополучной птицефермы снимают через 2 мес после ликвидации заболевания и проведения окончательной дезинфекции.